聚组氨酸(Polyhistidine)进行亲和素层析的方法
聚组氨酸(Polyhistidine)是一种含有多个组氨酸残基的多肽。亲和层析是一种常用的蛋白质纯化技术,其中亲和素是一种具有高亲和力的分子,可以选择性地结合目标蛋白质。聚组氨酸常用作亲和素,用于纯化带有His标签的蛋白质。
聚组氨酸亲和素层析的步骤如下:
1. 准备亲和素柱:将聚组氨酸共价地固定在固定矩阵上,例如琼脂糖或琼脂糖糖蜜。这样可以形成亲和素柱。
2. 样品制备:将含有His标签的目标蛋白质的样品溶液与细胞裂解液或培养基等混合。
3. 样品加载:将样品溶液缓慢地加载到亲和素柱上。His标签的蛋白质会与聚组氨酸发生特异性的亲和作用,被固定在亲和素柱上。
4. 洗脱非特异性结合物:通过流经亲和素柱的洗脱缓冲液,可以去除非特异性结合的杂质蛋白质。这些洗脱缓冲液通常包含较高的盐浓度和/或较低的pH值,以破坏非特异性相互作用。
5. 洗脱目标蛋白质:通过使用含有较高浓度的组氨酸或其他配体的洗脱缓冲液,可以解离目标蛋白质与亲和素之间的特异性相互作用,使目标蛋白质从亲和素柱上洗脱下来。
6. 蛋白质收集:收集洗脱液中的目标蛋白质。这些蛋白质已经被纯化并得到了高纯度。
聚组氨酸亲和素层析是一种高选择性和灵敏度的纯化方法,由于His标签在目标蛋白质上的特异性结合,可以有效地纯化目标蛋白质。此外,聚组氨酸还可以用于结合金属离子的亲和层析,通过与金属离子形成稳定的络合物,实现对目标蛋白质的选择性结合和纯化。
总结起来,聚组氨酸亲和素层析的步骤包括亲和素柱的准备、样品的加载、洗脱非特异性结合物、洗脱目标蛋白质以及蛋白质的收集。这种方法可以用于有效地纯化带有His标签的目标蛋白质。