化学多肽修饰：PEG修饰多肽，多肽的荧光标记
多肽修饰主要是肽链主链结构和侧链基团的修饰。通过修饰能够改变肽类化合物的物理化学性质，优化其在体内的有效利用。经过修饰的多肽类药物，能够显著降低免疫原性、减少毒负作用、增加水溶性、延长体内作用时间、改变体内分布状况等等。目前多肽标记及修饰的内容非常多，广泛应用在多肽药物，多肽生物学，多肽抗体以及多肽试剂的研究中。目前应用广泛的有：非放射性核素标记（C13，H2），荧光标记（FAM，FITC），生物素标记，磷酸化修饰等。
荧光标记由于没有放射性，实验操作简单。因此，目前在生物学研究中荧光标记应用非常广泛，荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系，对于有游离羧基的采用的方法与接肽反应相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。但是对于FITC标记，需要在连接FITC前，增加一个氨基己酸，避免在切割的过程中被TFA切割掉。
如何选择合适的荧光标记基团取决于您的实验需求。
药理学实验研究基本分为体内研究和体外研究两大类。
对于体内研究，一般选择发射波长在650-900nm的荧光基团，例如：ICG、Cy5.5和 Nile Blue。这是因为这类基团所发出的荧光具有较好的组织穿透能力，受背景干扰较小(水、血红蛋白和脱氧血红蛋白一般都会产生背景干扰吸收，其区域在560nm左右)。
对于体外研究，发射波长在400到600nm的荧光基团最为常用，例如：AMC、FITC和TAMRA。
荧光标记的多肽在现代医学中的应用是很广泛的。例如：用Cy5.5标记的目标多肽研究对 c-Met受体的绑定作用。有人设计含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP，其C端为GGGSC， C端Cys用 Cy5.5-Maleimide标记其巯基侧链。研究结果表明：上述Cy5.5-cMBP多肽与U87MG肿瘤细胞共孵24小时后，具有较高的癌细胞摄取值，其响应浓度在纳摩尔级别。多肽保存
为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。
多肽保存方法建议
所有的冻干多肽产品可以在常温下避光运输，并可以在室温条件下保存几天或者少于一个星期，多肽性状是稳定的。所有的冻干多肽产品，都必须保存在干燥低温的条件下，以-20℃的低温为佳，若有条件最好保存在-80℃以下，在这样的条件下大多数多肽可存放1-2年。
当需要使用多肽产品时，应在开盖之前将多肽产品升至室温；对保存于-20℃的产品，该过程需要1h或更长，因包装大小而异。否则，当打开瓶盖时，水气进入会导致多肽凝缩而降低其稳定性。一旦打开，应迅速称量完毕，并立即密闭以免潮解，亲水肽尤其应注意。
对序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽，应避免反复融冻，以免多肽被氧化和降解，因此建议分装成小包装保存。需要多少解冻多少，用后弃去，不要保存。
对于暂时不用的多肽，不要以溶液的形式保存（即使在-80°C的条件下）。
渝公网安备 50010902000940号