引言
WGA-Agarose的层析性能与再生条件直接影响其应用效果与成本。本文旨在优化其层析性能，提高分辨率与吸附容量，并探索最佳再生条件，以延长介质使用寿命。

实验方法

1. 层析性能优化

1. 交联密度影响：制备不同交联度（2%、4%、6%、8%）的WGA-Agarose，通过动态吸附实验（Breakthrough Curve）测定吸附容量与分辨率。

2. 流速优化：考察不同流速（0.5-2.0mL/min）对层析性能的影响。

2. 再生条件探索

1. 洗脱液选择：比较不同浓度的醋酸/NaCl溶液、盐酸胍溶液对糖蛋白的洗脱效果。

2. 活性保留率：通过Bradford法测定再生后介质的活性保留率。

结果与讨论

1. 层析性能优化

1. 交联密度：交联度为6%的WGA-Agarose在分离卵清蛋白与溶菌酶时，分辨率（Rs）可达2.3，吸附容量为18mg/mL凝胶。过度交联（>8%）会导致吸附容量下降25%。

2. 流速：流速为1.0mL/min时，层析性能最佳，流速过高（>1.5mL/min）会导致分辨率下降。

2. 再生条件

1. 最佳洗脱液：0.1M醋酸/0.5M NaCl溶液为最佳洗脱液，可完全洗脱结合的糖蛋白，且对介质活性影响较小。

2. 活性保留率：再生后介质的活性保留率可达92%以上，显著高于盐酸胍洗脱法（保留率78%）。

3. 长期稳定性

1. 储存条件：在4℃、含0.02%叠氮化钠的缓冲液中储存12个月后，介质对糖蛋白的吸附容量仅下降10%。

2. 重复使用性：在连续使用50次后，柱压仅上升18%，表明其具有良好的机械稳定性。

应用展望
优化后的WGA-Agarose层析性能与再生条件可显著降低层析成本，提高分离效率。未来可进一步探索其在工业化生产中的应用，如大规模糖蛋白纯化。

结论
本文优化了WGA-Agarose的层析性能与再生条件，为后续应用提供了重要参考。

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